化妝品保濕化妝品功效評價方法

在給定溫度和相對濕度條件下，保濕劑不斷從環境中吸收水分，潮解或者形成溶液。基于化妝品中不同保濕劑分子對水分子的作用力不同，吸收水分和保持水分的能力也略有差異。通過稱重法測試保濕劑的吸濕率可以表征該成分的保濕功效。

保濕劑在一定時間吸收的水分重量占該保濕劑重量的百分比，為此保濕劑在該時間內該相對濕度下的吸濕率。一般采用飽和硝酸鉀溶液維持94%的相對濕度。將涂抹有受試物的玻璃板置于簡易恒濕器的多孔隔板上，并保證隔板上下空氣的流通，放置一段時間后（2、4、6、8h）取出、稱重，計算吸濕率。

本方法適用于吸水性保濕原料或含有該類型保濕成分的保濕產品的吸濕率測定。油脂類保濕劑和水劑、乳液等含水量較高的產品不宜采用該方法。

1.2保濕性

保水率為在某一固定相對濕度的前提下，樣品放置不同時間后（樣品放置后的質量-樣品放置前的質量）/樣品放置前的質量*100%，反應產品隨時間的變化所呈現的吸濕性的大小。

不同保濕劑分子對水分子的作用力不同，保持水分的能力也略有差異。試驗常采用稱重法測試失水率表征保濕劑的保水能力，從而表征化妝品及其原料保持水分的能力大小。采用一定體積的飽和碳酸鉀溶液維持約43%的相對濕度。稱取一定量受試物溶液，均勻涂覆在貼有3M膠帶的玻璃板上，放置一段時間后（2、4、6、8h）稱量受試物的重量，計算失水率。失水率越大表示該保濕劑的保水性越差。失水率越小表示該保濕劑的保水性越強，長期保濕效果越好。

本方法適用于吸水性保濕原料或含有該類型保濕成分的保濕產品的失水率測定，油脂類保濕劑或含水量較低的膏霜類產品不宜采用該方法。

1.3吸濕穩定性

理想的保濕劑除了能在周圍環境中吸收水分，在一般濕度下保持水分外，還需要具備其吸收的水分隨著相對濕度變化較小的特點。當外界相對濕度變小時，如果保濕劑的吸收水分的能力變小將會導致皮膚干燥。吸濕穩定性的測定一般稱取同質量的某一固定保濕劑，將其放置在不同相對濕度的環境中，一段時間后比較其各自的吸濕量。如果不同環境中的吸濕量變化不大，表明該保濕劑的吸濕穩定性好。

1.4皮脂分析

皮脂膜是由皮膚表面的皮脂與汗液和水乳化后在皮膚表面形成的乳化皮脂薄膜，覆蓋在皮膚和毛發的表面。皮脂膜像一層無形的屏障影響皮膚的健康。皮脂膜可有效滋潤皮膚，使皮膚柔韌、潤滑、富有光澤、防止干裂。另外，皮脂膜可防止皮膚水分過度蒸發、防止外界水分及其他物質大量進入，鎖住水分，阻止營養物質、保濕因子及水分的散失，使皮膚含水量保持正常，對皮膚鎖水功能起到重要的屏障功能。

皮膚表面皮脂成分含量：甘油三酯約占20-60%、蠟脂約占23-29、角鯊烯約占10-14、游離脂肪酸約占5%-40%、膽固醇及膽固醇酯約占1-5%。皮膚表面脂質受多種因素的影響，皮脂成分含量也是在一定范圍內變動。通常情況下，通過分析神經酰胺、膽固醇、脂肪酸含量及其比例，分析皮脂成分是否存在偏頗，可間接反應皮脂膜的健康狀態。

1.5天然保濕因子

（NaturalMoisturizingFactor，NMF）

NMF是存在于角質層內與水結合的一些低分子量物質的總稱，包括氨基酸、吡咯烷酮羧酸、乳酸、尿素、尿刊酸、離子碳水化合物、氨、多態、葡糖胺及其他未知物質，是一類皮膚自身存在的、具有吸水特性的小分子復合物。與皮膚水合作用密切相關的NMF中最具代表性的為PCA、UCA、Urea，可以吸收大量的水分并保持水分不被散失。NMF作為一種低分子量水溶性的高效吸濕性分子化合物，能幫助角質細胞吸收水分，維持水合功能。

對NMF的定量測試常見的方法為：1.利用膠帶剝脫，采用高效液相色譜、液相色譜質譜聯用技術，對剝脫下的角質層細胞中UCA、PCA等成分進行分析，2.基于保濕的原理，從二維\三維細胞水平檢測與保濕相關基因的表達情況，利用3D皮膚模型直接檢測皮膚角質層中PCA、UCA、Urea的含量變化，再利用相似相容原理，采用高效液相色譜對角質層PCA、UCA、Urea進行分離和檢測。

1.6皮膚屏障相關蛋白及其基因表達

人體正常的皮膚有兩方面的屏障功能：一方面抵御外界各種物理、化學和生物等有害物質對皮膚的侵害，對酸、堿、有機溶劑及物理性摩擦具有一定的抵抗力；另一方面對外界物質的吸收、內部物質的流失具有明顯的限制作用，可阻止體液外滲與化學物質的內滲，防止水分散失。皮膚屏障受損表觀上將會導致細胞連接松散、易脫落，細胞間緊密連接能力變弱，角質細胞表面TEWL升高，皮膚保水能力下降，皮膚變的敏感、脆弱。所以，皮膚屏障功能在保持機體內環境的穩定上起著重要的作用。

皮膚屏障功能主要依靠角質層的“磚墻結構”。角質層的主要成分是角蛋白和脂質緊密有序的排列。所以，對皮膚屏障功能的檢測可以通過測定相關蛋白的表達間接反應皮膚的水合力、保水力。與皮膚屏障直接相關的蛋白主要包含：角蛋白、絲聚合蛋白、外皮蛋白、兜甲蛋白、轉谷氨酰胺酶、緊密連接蛋白-1等。其檢測方法主要包含：定量即時聚合酶鏈式反應

（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）、免疫細胞化（Immunocytochemistry，ICC）/免疫熒光（Immunofluorescence，IF）、免疫組化。

1.7水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）

皮膚固有的水合能力不僅由于角質細胞中NMF的存在，還依賴于皮膚內水分的運輸。AQPs是一類膜蛋白家族，可選擇性地轉運水和小分子溶質（如甘油）。

在人體皮膚中，AQP-3是AQPs家族表達最豐富的水通道蛋白亞型。其在表皮的表達量具有空間層次，主要表達于人表皮基底層，棘層、顆粒層，到角質層逐漸消失。AQP-3在基底膜帶的高表達，可以促使水，甘油及尿素的轉運，擔負著角質層甘油運輸的重要作用。AQP-3將內源性的甘油以及皮脂腺中的甘油三酯運輸進入表皮，使其直接或間接影響皮膚保濕功效。

通過抗原抗體的特異性結合，可以用熒光基團標記出表皮細胞表達的AQP3，熒光強度即對應了該蛋白的表達量，同時，通過定量即時聚合酶鏈式反應測定其mRNA的表達，從而可以一定程度上反映出皮膚轉運水分的能力。